제품
2019-nCoV용 Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 검출 키트
예상 사용량
이 키트는 인후 면봉, 비인두 면봉, 기관지폐포 세척액, 가래를 사용하여 신종 코로나바이러스(2019-nCoV)를 정성적으로 검출하는 데 사용됩니다. 이 제품의 검출 결과는 임상적 참고용으로만 사용되며 임상적 진단 및 치료의 유일한 증거로 사용해서는 안 됩니다. 환자의 임상 증상 및 기타 실험실 검사와 함께 상태에 대한 포괄적인 분석을 권장합니다.
검사 원리
이 키트는 원스텝 RT-PCR 기술을 기반으로 합니다. 실제로 2019년 신종 코로나바이러스(2019-nCoV) ORF1ab 및 N 유전자가 증폭 표적 영역으로 선정되었습니다. 특정 프라이머와 형광 프로브(N 유전자 프로브는 FAM으로, ORF1ab 프로브는 HEX로 표시)는 샘플에서 2019년 신종 코로나바이러스 RNA를 검출하도록 설계되었습니다. 또한, 이 키트에는 샘플 채취, RNA 및 PCR 증폭 과정을 모니터링하는 내인성 내부 대조군 검출 시스템(CY5로 표시된 내부 대조군 유전자 프로브)이 포함되어 있어 위음성 결과를 줄입니다.
주요 구성 요소
| 구성 요소 | 용량（48T/키트） |
| RT-PCR 반응 용액 | 96µl |
| nCOV 프라이머 TaqMan 프로브 혼합물(ORF1ab,N Gene,RnaseP Gene) | 864µl |
| 음성 대조군 | 1500µl |
| nCOV 양성 대조군(l ORF1ab N 유전자) | 1500µl |
자체 시약: RNA 추출 또는 정제 시약. 음성/양성 대조군: 양성 대조군은 표적 단편을 포함하는 RNA이고, 음성 대조군은 핵산이 없는 물입니다. 사용 중에는 추출 과정에 참여해야 하며 감염성 물질로 간주되어야 합니다. 관련 규정에 따라 취급 및 폐기해야 합니다.
내부 참조 유전자는 인간의 RnaseP 유전자입니다.
보관 조건 및 유통기한
-20±5℃, 5회 이상의 반복 동결 및 해동을 피하십시오. 유효기간은 6개월입니다.
적용 가능한 악기
FAM / HEX / CY5 및 기타 다중 채널 형광 PCR 장비를 사용합니다.
표본 요구 사항
1. 적용 가능한 검체 유형: 인후 면봉, 비인두 면봉, 기관지폐포 세척액, 가래.
2. 검체 채취(무균 기술)
인두 면봉 : 두 개의 면봉으로 편도선과 인두 후벽을 동시에 닦은 후 면봉 머리를 샘플링 용액이 담긴 시험관에 담근다.
객담: 환자가 심한 기침을 한 후, 기침한 객담을 검체 용액이 담긴 나사형 캡 시험관에 채취합니다. 기관지폐포세척액: 의료 전문가가 검체를 채취합니다. 3. 검체의 보관 및 운반
바이러스 분리 및 RNA 검사를 위한 검체는 가능한 한 빨리 검사해야 합니다. 24시간 이내에 검출 가능한 검체는 4°C에 보관할 수 있으며, 24시간 이내에 검출되지 않는 검체는 4°C에 보관할 수 있습니다.
-70℃ 이하에서 보관해야 합니다(-70℃ 보관 조건이 없는 경우에는 -70℃ 이하에서 보관해야 합니다).
-20°C 냉장 보관). 검체는 운송 중 반복적인 동결 및 해동을 피해야 합니다. 검체는 채취 후 가능한 한 빨리 검사실로 보내야 합니다. 장거리 운송이 필요한 경우, 드라이아이스 보관을 권장합니다.
테스트 방법
1 샘플 처리 및 RNA 추출(샘플 처리 구역)
RNA 추출에는 200μl의 액체 샘플을 채취하는 것이 좋습니다. 관련 추출 단계는 시판 RNA 추출 키트의 설명서를 참조하십시오. 음성 및 음성 샘플 모두
이 키트의 컨트롤은 추출에 관여했습니다.
2 PCR 시약 준비(시약 준비 구역)
2.1 키트에서 모든 구성품을 꺼내 실온에서 해동하고 혼합합니다. 사용 전 8,000 rpm에서 몇 초간 원심분리합니다. 필요한 시약량을 계산하면 아래 표와 같이 반응 시스템을 준비할 수 있습니다.
| 구성 요소 | N회 제공량(25µl 시스템) |
| nCOV 프라이머 TaqMan 프로브 혼합물 | 18 µl × N |
| RT-PCR 반응 용액 | 2 µl × N |
| *N = 검사된 샘플 수 + 1(음성 대조군) + 1(nCOV)양성 대조군) | |
2.2 모든 성분을 완전히 혼합한 후, 짧은 시간 동안 원심분리하여 튜브 벽에 있는 액체가 모두 튜브 바닥으로 떨어지도록 한 다음, 20 µl 증폭 시스템을 PCR 튜브에 분주합니다.
3 샘플링(시료 준비 구역)
추출 후 음성대조군과 양성대조군을 각각 5μl씩 첨가합니다. 검사할 샘플의 RNA를 PCR 반응 튜브에 첨가합니다.
튜브의 뚜껑을 단단히 닫고 증폭 검출 영역으로 옮기기 전에 8,000rpm으로 몇 초간 원심분리합니다.
4 PCR 증폭(증폭된 검출 영역)
4.1 반응 튜브를 기기의 샘플 셀에 넣고 다음과 같이 매개변수를 설정합니다.
| 단계 | 주기 숫자 | 온도(°C) | 시간 | 수집대지 |
| 뒤집다전사 | 1 | 42 | 10분 | - |
| 사전 변성n | 1 | 95 | 1분 | - |
| 주기 | 45 | 95 | 15초 | - |
| 60 | 30대 | 데이터 수집 |
기기 검출 채널 선택: 형광 신호용으로 FAM, HEX, CY5 채널을 선택하십시오. 기준 형광 신호용으로 NONE 채널을 사용하는 경우, ROX는 선택하지 마십시오.
5 결과 분석 (설정은 각 기기의 실험 지침을 참조하세요)
반응 후 결과를 저장합니다. 분석 후, 로그 그래프에서 이미지에 따라 기준선의 시작값, 종료값, 임계값을 조정합니다(사용자는 실제 상황에 따라 시작값을 3~15로, 종료값을 5~20으로 설정할 수 있습니다. 조정 가능). 윈도우의 임계값에서 임계값 선은 로그 위상에 있고, 음성 대조군의 증폭 곡선은 직선이거나 임계값 선 아래에 있습니다.
6 품질 관리(테스트에 절차적 관리가 포함됨) 음성 대조군: FAM, HEX, CY5 검출 채널에 대한 명확한 증폭 곡선 없음
COV 양성 대조군: FAM 및 HEX 검출 채널의 명확한 증폭 곡선, Ct 값≤32, 그러나 CY5 채널의 증폭 곡선은 없음
위의 요구 사항은 동일한 실험에서 동시에 충족되어야 합니다. 그렇지 않으면 실험은 유효하지 않으며 반복해야 합니다.
7 결과의 결정.
7.1 검사 샘플의 FAM 및 HEX 채널에 증폭 곡선이 없거나 Ct 값 > 40이고, CY5 채널에 증폭 곡선이 있는 경우, 샘플에 2019년 신종 코로나바이러스(2019-nCoV) RNA가 없다고 판단할 수 있습니다.
.2 검사 샘플이 FAM 및 HEX 채널에서 명확한 증폭 곡선을 보이고 Ct 값이 ≤40인 경우 해당 샘플은 2019년 신종 코로나바이러스(2019-nCoV)에 양성이라고 판단할 수 있습니다.
7.3 검사 샘플이 FAM 또는 HEX 채널 중 한 채널에서만 명확한 증폭 곡선을 보이고, Ct 값이 ≤40이며, 다른 채널에서는 증폭 곡선이 나타나지 않는 경우, 결과를 재검사해야 합니다. 재검사 결과가 일치하면 해당 샘플은 새로운 채널에 대해 양성으로 판정될 수 있습니다.
코로나바이러스 2019(2019-nCoV). 재검사 결과가 음성이면 해당 검체는 2019년 신종 코로나바이러스(2019-nCoV)에 대해 음성으로 판단할 수 있습니다.
긍정적 판단 가치
ROC 곡선법을 이용하여 키트의 기준 CT값을 결정하였고, 내부대조 기준값은 40이다.
시험 결과 해석
1. 각 실험은 음성 및 양성 대조군을 검사해야 합니다. 대조군이 품질 관리 요건을 충족하는 경우에만 검사 결과를 확인할 수 있습니다.
2. FAM 및 HEX 검출 채널이 양성일 경우, 시스템 경쟁으로 인해 CY5 채널(내부 제어 채널)의 결과는 음성일 수 있습니다.
3. 내부 대조 결과가 음성일 때, 시험관의 FAM 및 HEX 검출 채널도 음성이면 시스템 작동이 중단되었거나 작동에 문제가 있어 검사가 유효하지 않음을 의미합니다. 따라서 검체를 재검사해야 합니다.
