제품
2019-nCoV용 Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 검출 키트
예상 사용량
본 키트는 인후 면봉, 비인두 면봉, 기관지폐포세척액, 객담을 이용한 신형 코로나바이러스(2019-nCoV)의 정성 검출에 사용됩니다. 본 제품의 검출 결과는 임상 참고용일 뿐이며, 단독으로 사용해서는 안 됩니다. 임상 진단 및 치료에 대한 증거. 환자의 임상 증상 및 기타 실험실 테스트와 함께 상태에 대한 포괄적인 분석이 권장됩니다.
검사원리
이 키트는 원스텝 RT-PCR 기술을 기반으로 합니다.실제로 2019년형 신형 코로나바이러스(2019-nCoV) ORF1ab와 N 유전자가 증폭 대상 지역으로 선정됐다.특정 프라이머와 형광 프로브(N 유전자 프로브는 FAM으로 라벨링되고 ORF1ab 프로브는 HEX로 라벨링됨)는 샘플에서 2019년형 신형 코로나바이러스 RNA를 검출하도록 설계되었습니다.또한 키트에는 검체 수집, RNA 및 PCR 증폭 과정을 모니터링하여 위음성 결과를 줄이기 위한 내인성 내부 대조 검출 시스템(CY5로 표지된 내부 대조 유전자 프로브)이 포함되어 있습니다.
주요 구성품
| 구성요소 | 용량（48T/키트) |
| RT-PCR 반응 용액 | 96μl |
| nCOV 프라이머 TaqMan 프로브 혼합물(ORF1ab,N Gene,RnaseP Gene) | 864μl |
| 음성 대조군 | 1500μl |
| nCOV 양성 대조군(l ORF1ab N 유전자) | 1500μl |
자체 시약: RNA 추출 또는 정제 시약.음성/양성 대조군: 양성 대조군은 표적 단편을 함유한 RNA이고, 음성 대조군은 핵산이 없는 물입니다.사용하는 동안 추출에 참여해야 하며 감염성이 있는 것으로 간주되어야 합니다.관련 규정에 따라 취급 및 폐기되어야 합니다.
내부 참조 유전자는 인간 RnaseP 유전자입니다.
보관 조건 및 유효 기간
-20±5℃, 5회 이상 냉동과 해동을 반복하지 마십시오. 유효기간은 6개월입니다.
적용 가능한 기기
FAM/HEX/CY5 및 기타 다중 채널 형광 PCR 장비를 사용합니다.
시편 요구사항
1.적용 가능한 검체 유형: 인후 면봉, 비인두 면봉, 기관지 폐포 세척액, 가래.
2.검체 채취(무균 기술)
인두 면봉 채취: 면봉 2개로 편도선과 인두 후벽을 동시에 닦은 후 채취 용액이 담긴 시험관에 면봉 헤드를 담급니다.
가래: 환자가 깊은 기침을 한 후 샘플링 용액이 들어 있는 나사 캡 시험관에 기침한 가래를 수집합니다.기관지 폐포 세척액: 의료 전문가가 샘플링합니다.3. 시료의 보관 및 운송
바이러스 분리 및 RNA 테스트를 위한 검체는 가능한 한 빨리 테스트해야 합니다.24시간 이내에 검출될 수 있는 검체는 4℃에서 보관할 수 있습니다.24시간 이내에 감지할 수 없는 것
시간은 -70℃ 이하에서 보관해야 합니다. (-70℃의 보관 조건이 없는 경우에는
-20℃냉장고에 임시 보관).표본은 운송 중에 반복적으로 동결 및 해동을 피해야 합니다.검체는 수집 후 가능한 한 빨리 실험실로 보내야 합니다.샘플을 장거리 운송해야 하는 경우 드라이아이스 보관을 권장합니다.
테스트 방법
1 시료 처리 및 RNA 추출(시료 처리 영역)
RNA 추출을 위해서는 200μl의 액체 시료를 채취하는 것이 좋습니다.관련 추출 단계는 상용 RNA 추출 키트의 지침을 참조하세요.부정과 부정 모두
이 키트의 컨트롤이 추출에 참여했습니다.
2 PCR 시약 준비(시약 준비 영역)
2.1 키트에서 모든 구성품을 꺼내어 실온에서 해동하고 혼합합니다.사용하기 전에 몇 초 동안 8,000rpm으로 원심분리합니다.필요한 시약의 양을 계산하면 다음 표와 같이 반응 시스템이 준비됩니다.
| 구성요소 | N 서빙(25μl 시스템) |
| nCOV 프라이머 TaqMan 프로브 혼합물 | 18μl×N |
| RT-PCR 반응 용액 | 2μl×N |
| *N = 테스트된 샘플 수 + 1(음성 대조군) + 1(nCOV양성 대조군) | |
2.2 성분을 잘 섞은 후 잠시 원심분리하여 튜브 벽에 있는 액체가 모두 튜브 바닥으로 떨어지도록 한 다음 20 µl 증폭 시스템을 PCR 튜브에 분주합니다.
3 샘플링(시료 준비 영역)
추출 후 음성 및 양성 대조군 5μl를 추가합니다.테스트할 샘플의 RNA를 PCR 반응 튜브에 첨가합니다.
튜브를 단단히 닫고 몇 초 동안 8,000rpm으로 원심분리한 후 증폭 감지 영역으로 옮깁니다.
4 PCR 증폭(증폭된 검출 영역)
4.1 기기의 샘플 셀에 반응 튜브를 놓고 다음과 같이 매개변수를 설정합니다.
| 단계 | 주기 숫자 | 온도(°C) | 시간 | 수집대지 |
| 뒤집다전사 | 1 | 42 | 10 분 | - |
| 사전 변성n | 1 | 95 | 1 분 | - |
| 주기 | 45 | 95 | 15초 | - |
| 60 | 30대 | 데이터 수집 |
기기 감지 채널 선택: 형광 신호에 대해 FAM、HEX、CY5 채널을 선택합니다.참고로 형광등 NONE의 경우 ROX를 선택하지 마십시오.
5 결과 분석(설정은 각 기기의 실험 지침을 참조하세요)
반응 후 결과를 저장합니다.분석 후 영상에 따라 기준선의 시작값, 종료값, 임계값을 조정합니다(사용자는 실제 상황에 따라 조정 가능, 시작값은 3~15, 종료값은 3~15로 설정할 수 있음). 5~20, 조정) 로그 그래프 창의 임계값에서 임계값 선은 대수 위상에 있고 네거티브 컨트롤의 증폭 곡선은 직선 또는 임계값 라인 아래에 있습니다.
6 품질 제어(절차적 제어가 테스트에 포함됨) 음성 제어: FAM, HEX, CY5 감지 채널에 대한 명확한 증폭 곡선이 없습니다.
COV 양성 대조군: FAM 및 HEX 검출 채널의 명백한 증폭 곡선, Ct 값 ≤32, 그러나 CY5 채널의 증폭 곡선 없음;
위의 요구 사항은 동일한 실험에서 동시에 충족되어야 합니다.그렇지 않으면 실험이 유효하지 않으며 반복되어야 합니다.
7 결과 결정.
7.1 검체의 FAM, HEX 채널에 증폭곡선이 없거나 Ct값 > 40이고, CY5 채널에 증폭곡선이 있으면 2019년형 신형 코로나바이러스(2019-nCoV)가 없다고 판단할 수 있다. 샘플 내 RNA;
.2 테스트 샘플의 FAM 및 HEX 채널에서 뚜렷한 증폭 곡선이 있고 Ct 값이 40 이하인 경우 해당 샘플은 2019 신형 코로나바이러스(2019-nCoV)에 대해 양성이라고 판단할 수 있습니다.
7.3 테스트 샘플의 FAM 또는 HEX 중 한 채널에만 명확한 증폭 곡선이 있고 Ct 값이 40 이하이고 다른 채널에는 증폭 곡선이 없는 경우 결과를 다시 테스트해야 합니다.재검사 결과가 일관되면 검체는 신규에 대해 양성으로 판단할 수 있습니다.
코로나바이러스 2019(2019-nCoV).재검사 결과가 음성일 경우, 2019년형 신형 코로나바이러스(2019-nCoV)에 대한 검체는 음성으로 판단할 수 있습니다.
긍정적 판단 가치
키트의 기준 CT 값을 결정하기 위해 ROC 곡선 방법이 사용되며 내부 대조 기준 값은 40입니다.
테스트 결과 해석
1. 각 실험은 음성 및 양성 대조군에 대해 테스트되어야 합니다.테스트 결과는 컨트롤이 품질 관리 요구 사항을 충족하는 경우에만 결정될 수 있습니다.
2. FAM 및 HEX 감지 채널이 양성인 경우 시스템 경쟁으로 인해 CY5 채널(내부 제어 채널)의 결과가 음성일 수 있습니다.
3. 내부 제어 결과가 부정적일 때 테스트 튜브의 FAM 및 HEX 감지 채널도 부정적이면 시스템이 비활성화되었거나 작동이 잘못되었음을 의미하며 테스트가 유효하지 않습니다.따라서 샘플을 다시 테스트해야 합니다.
